自由基检测试剂盒尿液怎样用，分享一份相关说明书
试剂盒是用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。它一般在医院、制药企业使用，自由基是生命活动中各种生化反应的中间产物，具有高度的化学活性，那么自由基检测试剂盒尿液怎样用?本期分享一份相关说明书!希望对你有参考!
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中羟基自由基(HO·)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠羟基自由基(HO·)水平。用纯化的大鼠羟基自由基(HO·)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入羟基自由基(HO·)，再与HRP标记的羟基自由基(HO·)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的羟基自由基(HO·)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠羟基自由基(HO·)浓度。
样本处理及要求：
1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2、血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3、尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤：
1、标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60ng/L,40ng/L,20ng/L,10ng/L,5ng/L)。
2、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4、配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7、温育：操作同3。
8、洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间建议控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4、请每次测定的同时做标准曲线，建议做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9、本试剂不同批号组分不得混用。
10、如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
试剂盒性能：
1、样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2、批内与批见应分别小于9%和11%。
保存条件及有效期：
1、试剂盒保存：;2-8℃。
2、有效期：6个月
试剂盒的产生正是为了使实验人员能够摆脱繁重的试剂配制及优化过程，试剂盒中一般配备有相应的使用说明书，用户按照说明书只需少量的优化即可得到满意的结果。
说明书一般包括公司标志及名称、试剂盒名称、试剂盒组成、保质期、使用领域、使用方法等项目：
①一般在页眉页脚处为公司的名称及标志;
②接下来为试剂盒的名称;
③试剂盒组成中应为试剂盒中的所有内容，为了简洁明了，一般以表格的形式表现;
④操作步骤是试剂盒说明书中重要的部分，内容应准确、简洁、易懂，不能包含带有歧义的句子，更不能含糊其辞，排版上操作步骤应将复杂的步骤拆解，使人一目了然。可以说操作步骤为试剂盒的灵魂。
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